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021-65232515
          產品型號:
所屬分類:蛋白質組學實驗
產品時間:2025-07-09
簡要描述:提供商: 上海研謹生物服務名稱: 平行反應監(jiān)測技術(PRM) 實驗服務服務: 1-2周規(guī)格: 實驗服務價格: 500元歡迎咨詢詳談,我們會根據(jù)您的方案及需求制定詳細的服務協(xié)議。更多實驗技術服務請瀏覽網站其他內容,或來電詳詢!
平行反應監(jiān)測技術(PRM) :
PRM是一種基于高分辨、高精度質譜的離子監(jiān)視技術,能夠對目標蛋白質、目標肽段(如發(fā)生翻譯后修飾的肽段)進行選擇性檢測,從而實現(xiàn)對目標蛋白質/肽段進行定量。PRM技術基于Q-Orbitrap為代表的高分辨、高精度質譜平臺,首先
利用四級桿質量分析器的選擇能力,用Q1選擇目標肽段的母離子,隨后在Collision cell中對母離子進行碎裂,后利用Orbitrap分析器在二級質譜中檢測所選擇的母離子窗口內的所有碎片信息。這樣即可對復雜樣本中的目標蛋白質/肽段進行準確地特異性分析。
實驗意義:
PRM技術是針對無抗體蛋白的驗證新技術,用于label free, iTRAQ, TMT, SILAC等相對定量蛋白質組數(shù)據(jù)的驗證,或對復雜樣本中的目標蛋白質進行靶向定量分析。
實驗步驟:
用PRM進行蛋白質組數(shù)據(jù)驗證的一般步驟為:
 
結果展示
 
實驗完成周期及交付標準:
1.實驗周期: --般PRM時間為: 5-10天
2.交付標準:
組學驗證:
①主要儀器、試劑和實驗方法。
②PRM目標離子信息:肽段序列和定量子離子。
③方法學重復性評價:三次技術重復的色譜峰面積相對標準偏差(RSD) (預實驗結果) 。
④實驗結果:二級圖譜,XIC圖譜,原始峰面積強度值,矯正后的相對表達量,兩組樣本間的相對比值,ttest p值。
相對/定量:
①主要儀器、試劑和實驗方法。
②PRM目標離子信息:肽段序列和定量子離子。
③方法學評價:相對定量的重復性評價-測試樣本的三次技術重復的色譜峰面積相對標準偏差(RSD) (預實驗結果) ;
定量的方法學評價-標準品XIC圖譜,LOD, LOQ,線性范圍, 6個稀釋梯度得到的標準曲線及線性公式(每個稀釋度有3次技術重復)。
④實驗結果:
相對定量:二級圖譜,XIC圖譜,原始峰面積強度值,矯正后的相對表達量,兩組樣本間的相對比值,ttest p值。
定量:二級圖譜,XIC圖譜,原始峰面積強度值,根據(jù)標準曲線計算得到的蛋白質濃度值,兩組樣本間的相對比值,ttest p值。
需確認的信息:
1.樣品:
①如果樣品為蛋白質溶液,蛋白質總量≥300mg;
②如果是組織樣品,樣品總量≥0.1g;如果是細胞樣品,細胞數(shù)量≥107個;
③如果是體液樣品,血清≥200ml,腦脊液≥200ml, 尿液≥1ml,淚液≥1ml。
2.樣品采集過程中使用到塑料制品時,盡量使用無色產品,以減少塑料制品中雜質對質譜檢測的影響。
文獻參考
[1] Navin Rauniyar. Parallel Reaction Monitoring: A Targeted Experiment Performed Using High Resolution and HighMass Accuracy Mass Spectrometry. IntJ Mol Sci. 2015 Dec; 16(12): 28566- -28581.
實驗代做服務:
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